Une copie d’un rapport de formule sanguine et d’une électrophorèse de l’hémoglobine démontrant une hémoglobinopathie liée à HBB (atteint ou porteur) doivent être fournies avec toutes les requêtes.
Test diagnostique :
- Suspicion clinique de bêta-thalassémie ou d’anémie falciforme
Test de porteur :
- Origine ethnique connue pour une incidence augmentée d’hémoglobinopathies liées à HBB
- Au moins un apparenté atteint ou porteur
- Conjoint.e atteint.e ou porteur.se
Tout dépendant du résultat des études hématologiques, cette analyse peut varier. Si les études démontrent un risque pour une bêta-thalassémie (atteint ou porteur) avec aucune variation spécifique de l’hémoglobine détectée, ce test consiste à séquencer toutes les régions codantes et les régions introniques adjacentes du gène HBB (NM_000518.4). Si les études détectent une variation spécifique de l’hémoglobine (tel que HbS ou HbC), ce test consiste à génotyper la variation détectée (tel que NM_000518.4:c.20A>T pour HbS ou NM_000518.4:c.19G>A pour HbC).
Si un séquençage de HBB est réalisé, les régions ciblées sont enrichies à l'aide de sondes d'hybridation (IDT). Les librairies de séquençage sont préparées à l'aide d'une trousse commerciale (Illumina). Le séquençage massif en parallèle bidirectionnel de fragments de 150 pb est effectué sur la plate-forme Illumina. Les séquences produites sont alignées et comparées au génome de référence GRCh37. L’identité de l’échantillon est confirmée en parallèle en utilisant le SNaPshot™ Multiplex Kit de Applied Biosystems™. Les variations sont interprétées conformément aux recommandations dans le domaine (PMID: 25741868). Les variations du nombre de copies cliniquement pertinentes sont confirmées par une méthode orthogonale (gap-PCR, micropuce, MLPA ou TaqMan).
Si un génotypage est réalisé, les variations sont détectées par PCR conventionnelle et séquençage capillaire (Sanger). Les résultats positifs sont confirmés par des réactions de PCR et de séquençage indépendantes.
Si un séquençage de HBB est réalisé, la sensibilité et la spécificité analytiques sont >99% pour les variations de séquence et du nombre de copies. Un résultat négatif n'exclut pas la possibilité d'une variation rare non détectable par cette analyse chez cette personne. Cette analyse ne détecte pas toutes les variations possibles des gènes testés. Sauf mention explicite, seuls les exons codants et les régions introniques adjacentes sont ciblés. En outre, certains types de variations techniquement difficiles peuvent ne pas être détectés: grandes délétions/insertions, petites variations du nombre de copies, réarrangements géniques, variations dans des régions répétées de faible complexité ou des duplications segmentaires, variations post-zygotiques (PMID: 34007000). L'interprétation des résultats dépend fortement des informations cliniques et démographiques fournies au laboratoire.
Si un génotypage est réalisé, il ne détecte pas toutes les variations possibles de HBB. Un résultat négatif n'exclut pas la possibilité d'une variation rare non couverte par cette analyse chez cette personne. La performance de cette analyse dépend de la précision du diagnostic clinique, de l'origine ethnique et des relations familiales déclarées au laboratoire. Des variations localisées dans les sites de liaison des amorces et de rares erreurs de génotypage peuvent entraîner des résultats erronés.
Seules les variations cliniquement pertinentes sont rapportées. Les variations bénignes/probablement bénignes ou de signification incertaine, ayant des preuves de pathogénicité limitées, ne sont pas rapportées. Seulement les variations causant des hémoglobinopathies liées à HBB sont rapportées pour les tests de porteur.
Délai d'exécution : 4-6 semaines
Échantillons acceptés :
- 2 x 4 mL de sang (tube EDTA, bouchon violet) – 2 mL pour nouveau-né
- ADN : min 10 ug
- Liquide amniotique : min 10 mL
- Prélèvement des villosités choriales (CVS) : min 10 mg
- Amniocytes ou CVS cultivés : 2 flacons T25 confluents
- Pour tous autres types d'échantillons, contacter le laboratoire pour la disponibilité des analyses
Soumettez votre demande de test en utilisant notre requête de génétique moléculaire.
Une copie d’un rapport de formule sanguine et d’une électrophorèse de l’hémoglobine démontrant une hémoglobinopathie liée à HBB (atteint ou porteur) doivent être fournies avec toutes les requêtes.